Abstract: 【摘要】 目的 探索细胞周期蛋白A2（CCNA2）和细胞周期依赖性激酶1（CDK1）对中波紫外线（UVB）辐射的HaCaT细胞生长周期和细胞凋亡蛋白表达的影响。方法 检索基因表达数据库（GEO）收录的日光性皮炎（SD）患者转录组测序数据集GSE86406，经基因差异表达分析、京都基因和基因组数据库（KEGG）富集分析、蛋白-蛋白相互作用网络分析，筛选出SD致病机制中关键基因CCNA2、CDK1，并进一步在体外实验中探索其对人角质形成细胞功能的影响。将人角质形成细胞HaCaT分为NC组（仅正常培养）和UVB照射组（累计辐射剂量30 mJ/cm2），Western印迹法检测CCNA2、CDK1表达。分别过表达及联合过表达CCNA2、CDK1后行UVB照射建模（CCNA2 + UVB组、CDK1 + UVB组、CCNA2 + CDK1 + UVB组），以NC组和UVB组作为对照，流式细胞仪检测细胞周期变化，Western印迹法检测细胞增殖相关蛋白抗原Ki-67、增殖细胞核抗原（PCNA）、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶3（caspase3）、裂解的胱天蛋白酶3（cleaved-caspase3）表达，免疫共沉淀检测CCNA2与CDK1的相互作用。结果 人SD样本GEO测序数据分析显示，SD组CCNA2与CDK1表达显著低于健康对照组（log2FC = -1.16、-1.13，t = -6.71、-5.47，均P＜0.001）。Western印迹法检测显示，UVB组细胞周期蛋白CCNA2、CDK1表达显著低于NC组（t = 5.93、6.39，P = 0.004、0.003）。与HaCaT细胞UVB组（G1：65.66% ± 0.30%，S：27.56% ± 0.43%，G2：6.77% ± 0.28%）相比，CCNA2 + UVB组（G1：69.31% ± 0.61%，S：21.53% ± 0.44%，G2：9.16% ± 0.58%）和CCNA2 + CDK1 + UVB组（G1：69.15% ± 0.30%，S：20.02% ± 0.11%，G2：10.83% ± 0.34%）G1期、G2期细胞百分比升高，S期降低，均P＜0.001；而CDK1 + UVB组（G1：56.16% ± 0.27%，S：36.36% ± 0.28%，G2：7.48% ± 0.34%）G1期细胞百分比下降（P＜0.001），S期升高（P＜0.001），G2期差异无统计学意义（P = 0.102）。Western印迹实验显示，与UVB组（蛋白相对定量，Ki-67：0.92 ± 0.18，PCNA：0.54 ± 0.10，Bax：1.98 ± 0.29，Bcl-2：0.46 ± 0.10，cleaved-caspase3：2.05 ± 0.20）相比，CCNA2 + UVB组、CDK1 + UVB组Ki-67表达上调（1.75 ± 0.18、1.70 ± 0.13，均P＜0.05），PCNA表达差异无统计学意义（0.99 ± 0.13、1.00 ± 0.01，均P > 0.05） ，Bax表达下调（1.18 ± 0.67、0.79 ± 0.19，均P＜0.05），Bcl-2表达上调（0.88 ± 0.06、0.86 ± 0.07，均P＜0.05），CCNA2 + UVB组cleaved-caspase-3表达差异无统计学意义（1.55 ± 0.04，P > 0.05），CDK1 + UVB组cleaved-caspase-3表达下调（0.93 ± 0.07，P＜0.001）；CCNA2 + CDK1 + UVB组Ki-67、PCNA表达进一步上调（2.15 ± 0.14、1.33 ± 0.12，均P＜0.01），Bax、cleaved-caspase-3表达进一步下调（0.73 ± 0.05、0.71 ± 0.08，均P＜0.01），Bcl-2表达进一步上调（0.91 ± 0.02，P＜0.01）。免疫共沉淀实验显示，CCNA2与CDK1有相互作用。结论 CCNA2可与CDK1相互作用，协同促进角质形成细胞的周期调节、增殖，并抑制其凋亡发生。

Key words: Dermatitis, Solar dermatitis, CCNA2, CDK1, Cell cycle, Cell proliferation, Apoptosis