摘要:
目的 分析InnVit基因的抑制和过表达对永生化黑素细胞株B10BR细胞增殖、周期及凋亡的影响,探讨InnVit基因的生物学功能及其对白癜风中黑素细胞缺失的影响。方法 化学合成InnVit基因特异性siRNA片段以及构建过表达质粒载体P3XF-P120,lipofectamineTM 2000脂质体方法转染B10BR细胞。半定量RT-PCR法检测InnVit基因mRNA水平;Western印迹检测该蛋白水平变化;MTT法测定细胞增殖情况;流式细胞技术分析细胞周期和凋亡的变化。结果 InnVit基因抑制后mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组,InnVit基因过表达质粒组mRNA和蛋白表达水平显著高于对照组;转染后24、48、72 h抑制组的细胞存活量极显著下降(P < 0.01),过表达质粒组的细胞存活量在48和72 h极显著增加(P < 0.01)。转染后48 h基因抑制组的早期凋亡率从(10.24 ± 1.00)%升至(37.34 ± 3.26)%,过表达质粒组早期凋亡率从(14.58 ± 1.49)%降至(8.43 ± 0.86)%,与对照组比较,差异均有统计学意义(P < 0.01);转染48 h基因抑制组的G1期细胞由(56.11 ± 5.46)%增至(69.76 ± 6.08)%(P < 0.05),过表达质粒组的G1期细胞由(55.14 ± 5.65 )%降至(29.33 ± 3.01)%(P < 0.01)。结论 InnVit基因抑制使细胞增殖能力下降,促进细胞凋亡;InnVit基因的过表达增强了细胞的增殖能力,抑制细胞凋亡。其增殖能力的改变可能是通过细胞周期的调控调节的。