中华皮肤科杂志 ›› 2019, Vol. 52 ›› Issue (1): 25-32.doi: 10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2019.01.006
宋翠豪1 王睿1 陈双景2 郑力强1 赵梓纲1 杨京润1 李承新1
Song Cuihao1, Wang Rui1, Chen Shuangjing2, Zheng Liqiang1, Zhao Zigang1, Yang Jingrun1, Li Chengxin1
摘要: 【摘要】 目的 研究二甲双胍对人角质形成细胞系HaCaT细胞的影响并分析其机制。方法 采用1、2、5、10、20、50 mmol/L二甲双胍分别作用于HaCaT细胞24、48、72 h,CCK8法检测二甲双胍对HaCaT细胞存活率的影响。流式细胞仪检测0(对照组)、0.5、1、2、5、10 mmol/L二甲双胍对培养48 h的HaCaT细胞周期和凋亡的影响,Western印迹法检测HaCaT细胞增殖和分化相关蛋白角蛋白16、角蛋白17、角蛋白1、内披蛋白,凋亡相关蛋白Bax、Bcl?2及AKT/mTOR/STAT3通路蛋白表达水平的影响,ELISA检测HaCaT细胞炎症因子白细胞介素8(IL?8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-23分泌水平。统计学分析采用SPSS19.0软件,不同浓度组间观察指标的变化采用单因素方差分析,不同时间和不同浓度组间比较采用重复测量方差分析,两两多重比较采用LSD-t检验。结果 CCK8法显示,二甲双胍对HaCaT细胞增殖有抑制作用(F = 116.87,P < 0.05),且随着二甲双胍浓度的增加,细胞存活率逐渐降低。0、0.5、1、2、5、10 mmol/L二甲双胍干预HaCaT细胞48 h后,G2/M期细胞比例逐渐增加(5.55% ± 1.03%、6.37% ± 0.93%、8.57% ± 1.18%、10.05% ± 0.60%、10.76% ± 0.87%、13.63% ± 1.41%,F = 24.98,P < 0.05),早期细胞凋亡率逐渐升高(0.78% ± 0.71%、19.18% ± 1.41%、25.67% ± 1.34%、28.45% ± 0.92%、34.97% ± 2.12%、40.41% ± 1.49%,F = 296.08,P < 0.05);随二甲双胍浓度增加,角蛋白1、促凋亡蛋白Bax蛋白表达呈上升趋势(F = 8.86、5.38,均P < 0.05),角蛋白16、角蛋白17、凋亡蛋白Bcl?2蛋白表达呈下降趋势(F = 8.02、4.82、12.10,均P < 0.05),但各浓度组间内披蛋白的表达差异无统计学意义(F = 0.57,P > 0.05);不同浓度二甲双胍干预48 h后,HaCaT细胞IL-8、TNF-α表达水平明显下降(F = 33.89、14.99,均P < 0.05),但IL-23表达无明显变化(F = 2.12,P > 0.05)。随二甲双胍浓度增加,p-AKT、p-mTOR、p-STAT3表达水平逐渐下降(F = 11.38、0.35、4.38,均P < 0.05),而AKT、mTOR、STAT3蛋白表达差异无统计学意义(F = 0.66、0.35、4.24,均P > 0.05)。结论 二甲双胍可能通过调控AKT/mTOR/STAT3信号通路抑制HaCaT细胞增殖,促进HaCaT细胞分化,促进细胞凋亡及抑制炎症因子分泌。
宋翠豪 王睿 陈双景 郑力强 赵梓纲 杨京润 李承新. 二甲双胍对HaCaT细胞增殖分化和炎症因子分泌的影响[J]. 中华皮肤科杂志, 2019,52(1):25-32. doi:10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2019.01.006
Song Cuihao, Wang Rui, Chen Shuangjing, Zheng Liqiang, Zhao Zigang, Yang Jingrun, Li Chengxin . Effect of metformin on proliferation and differentiation of HaCaT cells and secretion of inflammatory factors by HaCaT cells[J]. Chinese Journal of Dermatology, 2019, 52(1): 25-32.doi:10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2019.01.006