中华皮肤科杂志 ›› 2023, Vol. 56 ›› Issue (7): 642-650.doi: 10.35541/cjd.20220573
唐志铭 荆梦晴 陆鹭 单霄 张翠侠 张晓宇 孟飒
Tang Zhiming, Jing Mengqing, Lu Lu, Shan Xiao, Zhang Cuixia, Zhang Xiaoyu, Meng Sa
摘要: 【摘要】 目的 探讨犀地凉血方对HaCaT细胞LncRNA NEAT1/miR-485-5p/STAT3调控网络及细胞增殖、凋亡的影响。方法 以IL-17诱导的HaCaT细胞为研究对象,通过qPCR、Western 印迹法检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3 mRNA和蛋白在HaCaT细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK细胞)中的表达。采用荧光原位杂交技术(FISH)观察LncRNA NEAT1、miR-485-5p在HaCaT细胞中的表达;采用双萤光素酶报告基因实验验证LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3之间的靶向调控关系。犀地凉血方煎煮取汁给予大鼠灌胃后采集含药血清,以含药血清干预和/或LncRNA-NEAT1过表达载体转染HaCaT细胞,将HaCaT细胞分对照组、过表达LncRNA NEAT1组、犀地凉血方组、犀地凉血方 + 过表达LncRNA NEAT1组,采用qPCR、Western 印迹法、流式细胞仪、CCK8等实验技术分别检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3表达及细胞增殖、凋亡情况。采用独立样本t检验、单因素方差分析、LSD-t检验进行统计学分析。结果 IL-17诱导的HaCaT细胞组LncRNA NEAT1、STAT3 mRNA相对表达水平(1.84 ± 0.21、2.20 ± 0.24)高于NHEK细胞组(1.00 ± 0.11、1.00 ± 0.11,均P < 0.05),miR-485-5p相对表达水平(0.32 ± 0.04)低于NHEK细胞组(1.00 ± 0.12,t = 2.94,P = 0.015);STAT3、p-STAT3蛋白表达水平(1.27 ± 0.13、2.43 ± 0.16)均高于NHEK细胞组(1.00 ± 0.11、1.00 ± 0.10,t = 2.54、3.02,均P < 0.05)。FISH检测显示,miR-485-5p与LncRNA NEAT1共定位于HaCaT细胞质。双萤光素酶报告基因实验显示,共转染野生型LncRNA NEAT1、STAT3重组质粒时,miR-485-5p组细胞相对萤光素酶活性明显低于阴性对照组(均P < 0.05);而共转染突变型LncRNA NEAT1、STAT3重组载体质粒时,miR-485-5p组细胞萤光素酶活性与阴性对照组差异无统计学意义(均P > 0.05)。过表达LncRNA NEAT1组HaCaT细胞中LncRNA NEAT1、STAT3(包括STAT3 mRNA和STAT3、p-STAT3蛋白)表达水平高于对照组,miR-485-5p表达水平低于对照组;犀地凉血方组LncRNA NEAT1、STAT3表达水平低于对照组,miR-485-5p表达水平高于对照组;犀地凉血方 + 过表达LncRNA NEAT1组LncRNA NEAT1、STAT3表达水平低于过表达LncRNA NEAT1组,而miR-485-5p表达水平高于过表达LncRNA NEAT1组(均P < 0.05)。CCK8法检测显示,药物干预24、48、72 h时,过表达LncRNA NEAT1组HaCaT细胞增殖活性明显高于对照组,犀地凉血方 + 过表达LncRNA NEAT1组HaCaT细胞增殖活性高于犀地凉血方组,但二者均低于对照组(均P < 0.05)。过表达LncRNA NEAT1组HaCaT细胞凋亡率(5.84% ± 0.28%)低于对照组(14.75% ± 0.83%,LSD-t = 3.48,P = 0.002),而犀地凉血方组(35.72% ± 3.62%)高于对照组(LSD-t = 5.34,P = 0.001);犀地凉血方 + 过表达LncRNA NEAT1组细胞凋亡率(27.64% ± 2.82%)高于过表达LncRNA NEAT1组(LSD-t = 9.06,P < 0.001)。结论 犀地凉血方能抑制HaCaT细胞增殖并促进其凋亡,作用机制与其干预LncRNA NEAT1/miR -485-5p/STAT3调控网络相关。
唐志铭 荆梦晴 陆鹭 单霄 张翠侠 张晓宇 孟飒. 犀地凉血方通过LncRNA NEAT1/miR-485-5p/ STAT3调控网络对HaCaT细胞增殖、凋亡影响的研究[J]. 中华皮肤科杂志, 2023,56(7):642-650. doi:10.35541/cjd.20220573
Tang Zhiming, Jing Mengqing, Lu Lu, Shan Xiao, Zhang Cuixia, Zhang Xiaoyu, Meng Sa. Effect of Xidi Liangxue recipe on the proliferation and apoptosis of HaCaT cells through the lncRNA NEAT1/miR-485-5p/STAT3 regulatory network[J]. Chinese Journal of Dermatology, 2023, 56(7): 642-650.doi:10.35541/cjd.20220573