中华皮肤科杂志 ›› 2006, Vol. 39 ›› Issue (1): 38-40.
田艳丽, 李春英, 王刚, 高天文, 卢涛, 李淼
TIAN Yan-li, LI Chun-ying, WANG Gang, GAO Tian-wen, LU Tao, LI Miao
摘要: 目的 从白癜风患者外周血B淋巴细胞中扩增获得原始亲本配对的抗体基因.方法 以正常人的黑素细胞为抗原,用活细胞ELISA法筛选50例白癜风血清,选择其中7例抗黑素细胞膜抗体强阳性的患者外周血分离得到CD19+B淋巴细胞,以10%甲醛溶液固定,蛋白酶K溶液通透化处理,进行in-cell PCR.用特异性引物进行in-cell RT-PCR扩增人免疫球蛋白轻链和重链可变区基因,采用Cre/loxP系统在细胞内完成轻重链的连接,然后经巢式PCR扩增获得具有细胞内原始亲本配对特性的单链抗体基因.结果 经in-cell PCR扩增,获得了与预期单链抗体大小一致的单一800bp产物.结论 利用in-cell PCR技术可以扩增白癜风原始亲本配对的自身抗体基因.