中华皮肤科杂志 ›› 2014, Vol. 47 ›› Issue (11): 780-784.
丁兰1,陈旭2,徐松2,黄丹3,鞠梅4,陈崑5,李新宇5,顾恒2,施辛6
1, 1,HUANG Dan3,
摘要: 目的 探讨不同剂量中波紫外线(UVB)照射对体外培养的人皮肤角质形成细胞NF-κB p65及其抑制因子IκBα表达的调控效应。 方法 4.5、10及50 mJ/cm2 UVB照射人角质形成细胞系及人原代角质形成细胞,设置未经照射的对照组,在照射后4 h使用Western印迹法测定细胞总蛋白中IκBα及NF-κB p65的表达水平。并对人原代角质形成细胞进行50 mJ/cm2 UVB照射,照射后继续培养2、4、8、12 h,分别测定4个时间点IκBα及NF-κB p65的表达水平。蛋白条带密度分析使用Quantity One?誖 4.6.8软件,分别计算IKKβ、IκBα、NF-κB p65以及磷酸化IKKα/β、IκBα、NF-κB p65和β肌动蛋白条带吸光度和面积的乘积,再分别计算IKKβ、IκBα和NF-κB p65与β肌动蛋白的比值,取3次实验结果。 结果 4.5和10 mJ/cm2 UVB照射后4 h,相对于对照组细胞,人角质形成细胞系及人原代角质形成细胞总蛋白中IKKβ、IκBα、NF-κB p65表达水平均无明显变化(P > 0.05);50 mJ/cm2 UVB照射后4 h,细胞系及原代角质形成细胞中IKKβ表达水平均无明显变化(P > 0.05);原代角质形成细胞IκBα表达水平(0.173 ± 0.055)较对照组细胞(0.462 ± 0.142)显著降低(t = 5.64,P < 0.05),NF-κB p65表达水平(0.076 ± 0.030)也较对照组细胞(0.120 ± 0.034)降低(t = 5.40,P < 0.05);角质形成细胞IκBα表达水平(0.160 ± 0.046)较对照组细胞(0.398 ± 0.136)轻度下调(t = 4.37,P < 0.05),NF-κB p65的表达水平无明显变化(P > 0.05)。50 mJ/cm2 UVB照射原代角质形成细胞后2 h,IκBα表达水平(0.140 ± 0.034)相对于对照组细胞(0.208 ± 0.031)开始下调(t = 17.55,P < 0.05),并随照射后时间延长下调效应更为显著;NF-κB p65的表达水平在2 h和4 h时较对照细胞无明显变化(P > 0.05),8 h时(1.162 ± 0.345)较对照细胞(1.235 ± 0.349)表达水平下调(t = 36.67,P < 0.05),12 h时(1.061 ± 0.246)较对照细胞(1.390 ± 0.226)仍下调(t = 28.71,P < 0.05),随着时间的推进下调效应无明显改变;磷酸化IKKα/β(ser176/180)、IKKβ、磷酸化IκBα(ser32)、磷酸化NF-κB p65(ser536)表达量均无明显改变(P > 0.05)。 结论 高剂量(50 mJ/cm2) UVB照射可显著抑制人原代角质形成细胞IκBα表达,同时轻度抑制NF-κB p65蛋白的表达,提示可能存在UVB照射人原代角质形成细胞引起NF-κB p65活化的另一种通路。