中华皮肤科杂志 ›› 2013, Vol. 46 ›› Issue (10): 719-722.
王焱1,王震英2,孙建方1,陈浩1,周武庆3,3,方方1,张国成4
Yan WANG 2, 2,2, 2, 2
摘要: 【摘要】 目的 探讨miR-21抑制物和miR-494模拟物转染A375细胞的最佳有效转染浓度及其对黑素瘤A375细胞增殖的影响。方法 取6个浓度梯度的miR-21抑制物和miR-494模拟物转染A375细胞,实时荧光定量PCR法检测相应的miRNA。继而用Cy5标记的miRNA模拟物阴性对照转染A375细胞,荧光显微镜下观察转染效率。用流式细胞仪检测转染后细胞增殖的变化。 结果 从A375细胞中成功提出miRNA。定量PCR结果显示,当转染物miR-21抑制物浓度为120 nmol/L时,转染细胞内有miR-21模拟物最大程度的下调表达,2-?驻?驻Ct值为0.80(0.65 ~ 0.92),低于对照组;当miR-494模拟物浓度为250 nmol/L时,转染细胞内有miR-494模拟物最大程度的上调,2-?驻?驻Ct值为126.82(111.52 ~ 144.22),明显高于对照组;miR-21抑制物转染组与miR-494模拟物转染组G1期细胞比率分别为(61.61 ± 3.25)%、(61.05 ± 3.17)%,高于对照组(P < 0.05);增殖指数分别为(38.39 ± 3.25)%、(38.95 ± 3.17)%,低于对照组(P < 0.05);细胞凋亡率分别为(27.74 ± 1.39)%、(34.30 ± 2.35)%,高于对照组(P < 0.01),细胞转染效率达90%以上。 结论 miR-21抑制物和miR-494模拟物促使肿瘤细胞的G1期阻滞和促进凋亡作用,miR-21可增强A375细胞增殖,有原癌基因样功能; miR-494可抑制A375细胞增殖,有抑癌基因样作用。 【关键词】 黑色素瘤; miRNA-21; miRNA-494; 转染; 细胞周期; 细胞凋亡