摘要:
目的 探讨HINT1基因对人黑素瘤细胞A375增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法 应用构建的pcDNA.3.1/myc-His(-)A-HINT1真核表达载体,建立稳定转染且能高表达HINT1的A375细胞模型。用MTT法检测细胞增殖活性变化,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率,TUNEL法检测细胞凋亡。分光光度法检测Caspase 3, Caspase 8 及Caspase 9的相对活性。Western印迹法检测bcl-2、bax、细胞色素C 及 p53的表达。 结果 与空载体-A375及未转染A375细胞相比,HINT1-A375细胞生长速度明显减慢(P < 0.05);G1期细胞增多(73.17% ± 3.99%,F = 25.65,P < 0.05),S期细胞减少(16.75% ± 1.62%,F = 75.48,P < 0.01),细胞出现明显的晚期凋亡(23.57% ± 9.58%,F = 11.71,P < 0.01 )。TUNEL法显示凋亡阳性细胞百分比(12% ± 1%)显著增高(F = 358.02,P < 0.01 );Caspase 9(0.45 ± 0.03,F = 135.62,P < 0.01)和Caspase 3表达(0.46 ± 0.04,F = 90.28,P < 0.01)升高。凋亡相关蛋白bax、细胞色素C 及 p53表达增加,bcl-2表达降低。结论 高表达HINT1可抑制A375细胞的增殖,促进其凋亡,细胞周期出现G1期阻滞,提示HINT1可能是人黑素瘤的抑癌基因。