摘要:
目的 探讨克隆和表达沙眼衣原体热休克蛋白60(hsp60)基因。方法 PCR分离扩增hsp60的基因片段,纯化后双酶切,克隆到原核表达载体pET-28a,构建重组表达载体pET-28a- hsp60,PCR、双酶切及测序鉴定。转染大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western印迹检测。结果 PCR与双酶切结果显示所构建的重组质粒已成功地克隆hsp60基因,测序结果与基因库公布的一致。SDS- PAGE检测表达产物,在相对分子量60 000处有表达条带。Western印迹鉴定是表达目的蛋白。纯化后纯度达90%以上,产量为17.85 mg/L。结论 构建pET-28a-hsp60重组体并成功表达可溶性hsp60蛋白。
中图分类号: