徐秀莲1, 戚金亮2, 刘毅1, 宋亚丽1, 高莹1, 姜祎群1, 曾学思1, 孙建方1
XU Xiu-lian1, QI Jin-liang2, LFU Yi1, SONG Ya-li1, GAO Ying1, JIANG Yi-qun1, ZENG Xue-si1, SUN Jian-fang1
摘要: 目的 探讨针对端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的小干扰RNA(siRNA)技术对皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)细胞株Hut78端粒酶活性和细胞生长的影响。方法 用T7 RNA聚合酶介导的体外转录法合成两对hTERT-siRNA,将合成的siRNA转入Hut78细胞中,用端粒酶重复序列扩增及酶联免疫吸附方法(TRAP-PCR-ELISA)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测Hut78细胞端粒酶活性及hTERT mRNA的表达。用MTT法和流式细胞仪分析细胞增殖及凋亡的变化。结果 将合成的siRNA(250 ng)转染入Hut78细胞48 h后,端粒酶活性被明显抑制,抑制率分别为68%和64%;hTERT mRNA的表达下降。细胞生长抑制作用有明显的剂量依赖性,以1000 ng剂量抑制效果最明显。同时观察到细胞凋亡,凋亡率分别为15.86%和11.10%(P>0.05)。结论 体外转录法合成的hTERT-siRNA能明显抑制Hut78细胞端粒酶的活性,降低hTERT基因表达,抑制细胞生长增殖及诱导细胞凋亡。