马尔尼菲青霉酵母细胞黑素的分离纯化及理化性质的分析

中华皮肤科杂志 ›› 2013, Vol. 46 ›› Issue (5): 345-348.

马尔尼菲青霉酵母细胞黑素的分离纯化及理化性质的分析

郭婷¹,梁伶²,刘栋华³,韦立莉¹

1. 广西医科大学第一附属医院皮肤性病科
2. 南宁广西医科大学附属第一医院皮肤科
3. 广西医科大学第一附属医院皮肤科

收稿日期:2012-06-18 修回日期:2012-07-25 出版日期:2013-05-15 发布日期:2013-05-01
通讯作者: 刘栋华 E-mail:ldhgxmu@163.com
基金资助:
国家自然科学基金

Isolation, purification and physicochemical characterization of melanin from yeast cells of Penicillium marneffei

Ting GUO¹, ²,Dong-Hua LIULi-Li WEI²

Received:2012-06-18 Revised:2012-07-25 Online:2013-05-15 Published:2013-05-01
Contact: Dong-Hua LIU E-mail:ldhgxmu@163.com

摘要/Abstract

摘要： 【摘要】目的探讨提取、纯化马尔尼菲青霉（PM）酵母细胞的黑素并研究其理化性质。方法在基础液体培养基中加入左旋多巴37 ℃振荡培养PM酵母细胞，通过溶壁酶、变性剂和浓酸等处理PM酵母细胞以分离提取黑素，用化学分析、紫外光谱、红外光谱以及电子顺磁共振（EPR）波谱研究PM黑素的理化性质。结果 PM黑素与合成多巴黑素的理化性质相似，均溶解于碱，不溶于酸，不溶于水和大多数有机溶剂，在pH≤3时产生沉淀，能被氧化剂H2O2漂白。紫外光谱分析显示，在205 nm处有最大吸收峰，随波长的增加其吸收值减小。红外光谱分析表明，PM黑素具有经典的黑素红外吸收特征，即在3 μm附近和6 μm附近各有一个吸收峰；EPR提示PM黑素含有稳定的自由基。结论 PM酵母细胞能利用外源性左旋多巴合成多巴黑素。【关键词】马尔尼菲青霉；黑素类；理化性质

关键词: 马尔尼菲青霉, 黑素类, 理化性质

Abstract: GUO Ting, LIANG Ling, LIU Dong-hua, WEI Li-li. Department of Dermatology and Venereology，First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530021, China Corresponding author： LIU Dong-hua, Email: ldhgxmu@163.com 【Abstract】 Objective To isolate and purify melanin from yeast cells of Penicillium marneffei （PM） and to analyze its physicochemical features. Methods PM yeast cells were cultured in minimal medium containing levodopa （L-dopa） with continuous shaking at 37 ℃. Melanin was isolated from the yeast cells of PM by cell wall-lysing enzyme, denaturant, concentrated hot acid, and purified by sodium hydroxide and concentrated hydrochloric acid. The physicochemical properties of isolated melanin were assessed on the basis of combined chemical analysis and spectroscopic methods including ultraviolet-visible （UV-vis）, Fourier transform infrared （FT-IR） and electron-paramagnetic resonance （EPR）. Results Similar to synthetic dopa-melanin, the isolated melanin from PM was alkali soluble, acid-resistant, insoluble in water and most organic solvents, precipitated at or below PH 3, and could be bleached by hydrogen peroxide. UV-vis spectrophotometric analysis showed that the PM-derived melanin had a typical absorption peak at 205 nm and the absorbance decreased with the increase of wavelength. FT-IR spectroscopy displayed two absorption peaks at about 3 μm and 6 μm, which was characteristic of classic melanin. EPR spectroscopy revealed that the isolated melanin contained stable free radicals. Conclusion Yeast cells of PM can use exogenous L-dopa to synthesize dopa-melanin. 【Key words】 Penicillium marneffei; Melanins; Physicochemical properties

Key words: Physicochemical characterization

郭婷梁伶刘栋华韦立莉. 马尔尼菲青霉酵母细胞黑素的分离纯化及理化性质的分析[J]. 中华皮肤科杂志, 2013, 46(5): 345-348.

Ting GUO Dong-Hua LIU Li-Li WEI. Isolation, purification and physicochemical characterization of melanin from yeast cells of Penicillium marneffei [J]. Chinese Journal of Dermatology, 2013, 46(5): 345-348.

[1]	张倩影梁伶曹存巍刘栋华. 两性霉素B和伏立康唑对马尔尼菲青霉菌临床株超微形态影响的研究[J]. 中华皮肤科杂志, 2015, 48(8): 572-575.
[2]	覃巍杨亚波阙冬梅鲁莎胡永轩谢治席丽艳. 巢式PCR检测石蜡包埋组织中着色霉、孢子丝菌和马尔尼菲青霉[J]. 中华皮肤科杂志, 2011, 44(8): 544-547.
[3]	蔡灵龙汪宇申小平陆洪光. 窄谱UVB治疗白癜风疗效及黑素恢复观察[J]. 中华皮肤科杂志, 2009, 42(9): 638-639.
[4]	涂彩霞张荣鑫刘敏李国艳黄畋. N-乙酰氨基葡萄糖对酪氨酸酶活性及小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成的影响[J]. 中华皮肤科杂志, 2009, 42(9): 632-634.
[5]	蔡仁慧计雄飞程波. 顽固性马尔尼菲青霉致皮肤肉芽肿一例[J]. 中华皮肤科杂志, 2009, 42(4): 281-282.
[6]	汤芦艳傅雯雯张勇祝绿川郑志忠. 卡泊三醇对黑素细胞黑素合成的影响[J]. 中华皮肤科杂志, 2009, 42(11): 771-773.
[7]	马景昕, 涂彩霞, 陈晓燕, 张开立, 刘佳, 李宏. 中药对豚鼠皮肤酪氨酸酶mRNA水平的影响及致色素作用[J]. 中华皮肤科杂志, 2005, 38(2): 92-94.
[8]	肖和, 张信江, 李大铁. 三氧化二砷对A375人恶性黑素瘤细胞株酪氨酸酶活性及黑素生成的影响[J]. 中华皮肤科杂志, 2005, 38(1): 38-40.
[9]	许爱娥, 尉晓冬, 武家才, 沈宏, 洪为松. 胎盘中提取的黑素生成素有效成分分析及动物实验[J]. 中华皮肤科杂志, 2003, 36(2): 97-99.
[10]	马晶波, 黄岚, 冯树芳, 郑志忠, 祝禄川. 甘草黄酮对黑素细胞生物学作用的比较[J]. 中华皮肤科杂志, 2003, 36(10): 586-588.
[11]	周春丽, 叶庆佾, 郝飞, 刁庆春. 甲氧沙林对人毛囊黑素细胞增殖、活化和黑素合成作用的研究[J]. 中华皮肤科杂志, 2002, 35(6): 460-461.
[12]	陆洪光, Pearse A, Marks R. 不同肤色人种角层细胞黑素含量和形态的比较[J]. 中华皮肤科杂志, 2000, 33(4): 254-256.
[13]	雷铁池, 朱文元, 夏明玉, 张美华, 范卫新. 8-甲氧补骨脂素对小鼠黑素瘤细胞黑素生成的调节及相关信号转导研究[J]. 中华皮肤科杂志, 1999, 32(2): 115-118.