中华皮肤科杂志 ›› 2013, Vol. 46 ›› Issue (4): 278-281.

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甘草次酸抑制表皮细胞生长因子对HaCaT细胞促增殖作用的机制研究

解凡1,曹毅2,刘改荣3,杨晓红4,代群4,陈微4   

  1. 1. 浙江中医药大学附属第一医院
    2. 浙江中医药大学第一附属医院
    3. 浙江中医药大学
    4. 浙江省中医院
  • 收稿日期:2012-04-09 修回日期:2012-11-18 出版日期:2013-04-15 发布日期:2013-04-01
  • 通讯作者: 曹毅 E-mail:caoyi1965@163.com
  • 基金资助:
    浙江省自然科学基金（茶多酚治疗白癜风的作用机制研究）

Mechanisms underlying the inhibitory effect of glycyrrhetinic acid on epidermal growth factor-induced proliferation of HaCaT cells

  • Received:2012-04-09 Revised:2012-11-18 Online:2013-04-15 Published:2013-04-01

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摘要： 目的 探讨甘草次酸对表皮细胞生长因子（EGF）诱导的HaCaT细胞增殖的影响，并对其可能机制进行相关研究。方法 MTT法检测不同浓度EGF （0、1、5、10、25、50、100 ?滋g/L） 以及不同浓度甘草次酸（0、0.1、1、10、25、50、100 ?滋mol/L）对HaCaT细胞增殖的影响，25 ?滋mol/L甘草次酸、10 ?滋mol/L MEK1/2抑制剂 （U0126） 对25 ?滋g/L EGF促HaCaT细胞增殖的抑制作用。蛋白免疫印迹法检测25 ?滋g/L EGF对ERK1/2磷酸化的促进作用，25 ?滋mol/L甘草次酸、10 ?滋mol/L U0126对ERK1/2磷酸化的抑制作用，25 ?滋g/L EGF、25 ?滋mol/L甘草次酸、10 ?滋mol/L U0126分别或同时作用下HaCaT细胞增殖细胞核抗原（PCNA）、Notch-1蛋白的表达情况。使用SPSS17.0统计软件对实验数据进行t检验、方差分析和相关分析。结果 EGF在0 ～ 100 ?滋g/L范围内促进HaCaT细胞增殖（r = 0.798，P ＜ 0.05），在0 ～ 50 ?滋g/L 范围内与HaCaT细胞增殖呈线性相关（r = 0.859，P ＜ 0.05）。甘草次酸在10 ～ 100 ?滋mol/L范围内浓度依赖性地抑制HaCaT细胞增殖（r = －0.945，P ＜ 0.01）；25 ?滋mol/L甘草次酸明显抑制25 ?滋g/L EGF对HaCaT细胞的促增殖作用以及对ERK1/2的促磷酸化作用。同时，25 ?滋mol/L甘草次酸、10 ?滋mol/L U0126均抑制25 ?滋g/L EGF对HaCaT细胞PCNA、Notch-1蛋白的促表达作用。结论 甘草次酸可抑制EGF对HaCaT细胞的促增殖作用，其机制可能与甘草次酸抑制EGF对HaCaT细胞ERK1/2信号通路的激活有关。

关键词: 表皮细胞生长因子, HaCaT细胞, 甘草次酸

Abstract: XIE Fan, CAO Yi, LIU Gai-rong, YANG Xiao-hong, DAI Qun, CHEN Wei. Department of Dermatology, First Affiliated Hospital, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310006, China Corresponding author: CAO Yi, Email: caoyi1965@163.com 【Abstract】 Objective To estimate the effect of glycyrrhetinic acid on epidermal growth factor （EGF）-induced proliferation of HaCaT cells, and to investigate its possible mechanism. Methods Methyl thiazolyl tetrazolium （MTT） assay was used to evaluate the proliferation of HaCaT cells treated with different concentrations of EGF （0，1，5，10，25，50，100 μg/L） and glycyrrhetinic acid （0，0.1，1.0，10，25，50，100 μmol/L） alone, or the combination of 25 μg/L EGF with 25 μmol/L glycyrrhetinic acid or 10 μmol/L U0126 （an inhibitor of MEK1/2）. Western blot was carried out to measure the protein expression of proliferating cell nuclear antigen （PCNA）, Notch-1, ERK 1/2 and phosphorylated ERK 1/2 in HaCaT cells treated with 25 μg/L EGF, 10 μmol/L U0126, 25 μmol/L glycyrrhetinic acid alone or in combination. Data were statistically analyzed by using t test, analysis of variance and correlation analysis with SPSS 17.0 software. Results EGF of 0－100 μg/L promoted the proliferation of HaCaT cells in a dose-dependent manner （r = 0.798, P ＜ 0.05）, and there was a linear correlation between the effect and concentration within the concentration range 0－50 μg/L（r = 0.859, P ＜ 0.05）. However, glycyrrhetinic acid of 10－100 μmol/L inhibited the proliferation of HaCaT cells in a dose-dependent manner（r = －0.945, P ＜ 0.01）, and 10 μmol/L glycyrrhetinic acid could suppress the EGF （25 μg/L）-induced proliferation and phosphorylation of ERK1/2 in HaCaT cells. Also, both 25 μmol/L glycyrrhetinic acid and 10 μmol/L U0126 could attenuate the increase in PCNA and Notch-1 expression in HaCaT cells induced by 25 μg/L EGF. Conclusion Glycyrrhetinic acid can inhibit the EGF-induced proliferation of HaCaT cells, likely by suppressing the activation of ERK1/2 signaling pathway.

Key words: EGF, glycyrrhetic acid