中华皮肤科杂志 ›› 2013, Vol. 46 ›› Issue (11): 815-819.
陈旭1,郭新云2,徐松1,张孟丽1,金慧3,邢美春4,黄丹5,任发亮6,杜开和4,鞠梅7,李新宇8,陈崑8,周之海3,顾恒1
摘要: 【摘要】 目的 研究血清饥饿处理对人角质形成细胞系HaCaT细胞自噬的调控效应,初步分析其分子机制。 方法 采用血清饥饿处理体外培养的HaCaT细胞诱导自噬,分析血清饥饿对细胞形态和细胞活力(MTT法)的影响。透射电镜观察自噬体囊泡形成,使用Western印迹法进行自噬标志性分子LC3-Ⅰ→LC3Ⅱ转化分析和自噬关键基因Atg7的表达以及MDC染色标记自噬体囊泡。对mTOR的蛋白表达及其ser2448和ser2481位点磷酸化产物水平进行分析。 结果 血清饥饿HaCaT细胞活力上升,电镜观察和MDC染色发现,血清饥饿处理的HaCaT细胞中有自噬体囊泡形成。Western印迹显示,血清饥饿细胞LC3-Ⅰ→LC3Ⅱ转化(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率为3.508 ± 0.415)较正常培养的细胞(0.538 ± 0.038)显著上调(两组比较,t = 13.32,P < 0.01);自噬关键基因Atg7表达上调(对照细胞和血清饥饿细胞Atg7/GAPDH分别为0.021 ± 0.006和0.048 ± 0.011,t = 7.27,P < 0.05)。血清饥饿处理的细胞中,mTOR的ser2448位点、ser2481位点磷酸化产物水平显著降低(对照细胞和血清饥饿细胞间的磷酸化mTORser2448/mTOR比率分别为0.762 ± 0.108和0.394 ± 0.048,t = 7.58,P < 0.05;磷酸化mTORser2481/mTOR的比率分别为0.263 ± 0.039和0.111 ± 0.020,t = 13.77,P < 0.01)。 结论 血清饥饿处理可以诱导HaCaT细胞发生自噬,并且导致细胞活力上升。这种自噬的诱导可能与自噬调控关键元件mTOR蛋白活化抑制相关。 【关键词】 角蛋白细胞; 自噬; 细胞,培养的