摘要:
目的 探讨系统性硬化病(SS)患者皮损成纤维细胞单克隆Ⅲ型前胶原基因的转录特性及丹参对其的调控。方法 构建含有人Ⅲ型前胶原α1链(COL3A1)基因不同长度转录调控序列的重组质粒,利用瞬时转染、双荧光素酶报告基因技术检测其在SS患者皮损和正常人皮肤胶原合成异质性成纤维细胞克隆中的活性,并筛选出COL3A1近端转录调控靶序列。再通过转染、报告基因测活技术测定丹参注射液及其主要单体(丹参素钠、丹酚酸B、原儿茶醛和丹参酮ⅡA)对SS和正常人胶原合成异质性成纤维细胞克隆COL3A1近端启动区活性的调控。应用SPSS15.0软件进行统计学分析,基因转染、测活实验中,phCOLH30.1活性的比较采用t检验;丹参干预实验中,phCOLH30.1活性的比较采用双因素方差分析,若两因素存在交互作用,再进行单因素方差分析;若无交互作用,去除交互项,检验主效应。结果 6个COL3A1转录调控序列中,近端启动区-96 bp ~ +16 bp在SS组和正常对照组不同成纤维细胞克隆具有最高或较高的活性,且其活性与克隆的胶原合成能力呈正相关。丹参注射液下调COL3A1近端启动区在SS组(阴性对照组高、低胶原合成克隆COL3A1近端启动区相对活性分别为3.879 ± 0.309和2.150 ± 0.262,丹参注射液组分别为2.261 ± 0.619和1.462 ± 0.291,与阴性对照组相比,P均 < 0.01)和正常对照组高、低胶原合成克隆中的活性(阴性对照组分别为3.039 ± 0.271和2.223 ± 0.247,丹参注射液组分别为1.681 ± 0.263和1.121 ± 0.361,与阴性对照组相比,P均 < 0.01)。丹酚酸B下调COL3A1近端启动区在SS组高胶原合成克隆中的活性(为2.309 ± 0.524,与阴性对照组高胶原合成克隆相比,P < 0.01)和在正常对照组高、低胶原合成克隆中的活性(分别为2.126 ± 0.320和1.976 ± 0.362,与阴性对照组相比,P < 0.05)。丹参酮ⅡA仅下调COL3A1近端启动区在SS组高胶原合成克隆中的活性(2.975 ± 0.666,阴性对照组为5.379 ± 0.238,P < 0.01)。丹参素钠、原儿茶醛对COL3A1近端启动区在成纤维细胞克隆中的活性无抑制作用。结论 SS成纤维细胞高胶原合成克隆的Ⅲ型前胶原基因在转录水平即被激活并能被丹参注射液、单体丹酚酸B和丹参酮ⅡA抑制。