中华皮肤科杂志 ›› 2012, Vol. 45 ›› Issue (12): 886-890.
苏忠兰1,毕志刚2,张美华1,纪超3,陈斌1,夏济平4,孙蔚凌1,高千5,王宏伟5
摘要:
目的 分析人皮肤角质形成细胞中蛋白酶激活受体2(PAR2) 的表达及其生物学功能,探讨其在皮肤屏障中的作用。方法 以体外培养的人皮肤角质形成细胞原代细胞或细胞系N//TERT 细胞为研究对象,通过免疫荧光染色及蛋白印迹分析细胞中PAR2的表达及分布特点,采用荧光标记的钙流释放法测定PAR2的生物学功能,利用PAR2 的天然底物胰蛋白酶或其激活肽、对照肽及拮抗肽诱导PAR2的活化,观察不同作用底物诱导PAR2活化的特点。 结果 在正常培养条件下,PAR2在皮肤角质形成细胞中呈中低水平表达,不同的培养基组成及培养时间对PAR2的表达水平无明显影响。PAR2的作用底物诱导细胞的钙流释放具有时间及浓度依赖性特点,其中使用50 ~ 250 nmol/L胰蛋白酶作用于角质形成细胞后,可以诱导细胞内钙流释放;使用75 ~ 250 μmol/L PAR2特异性激活肽PAR2-AP (H2N-SLIGKV-COOH)处理角质形成细胞后,即可最大程度地诱发PAR2的活化。而在相同浓度PAR2的拮抗肽PAR2-ANTAP (H2N-FSLLRY-COOH)作用下,PAR2的作用底物所诱导的细胞钙流释放明显受到抑制。分析比较相关荧光强度发现,PAR2激活底物诱导的细胞内钙流释放可以在瞬间(0 ~ 250 s)完成,以50 s的作用时间点细胞内钙流释放强度最大。此外,PAR2的激活可以显著增加皮肤角质形成细胞ERK蛋白的磷酸化水平,从而激发细胞内MAPK信号转导通路。结论 皮肤角质形成细胞表面表达有PAR2受体,该受体活化受胰蛋白酶及PAR2的特异性激活肽调控,PAR2的活化可影响角质形成细胞的生理功能,诱导细胞内钙流释放。