中华皮肤科杂志 ›› 2012, Vol. 45 ›› Issue (12): 878-881.
李志加1,孙立新2,陆洁3,段昕所4
摘要:
目的 探讨小干扰RNA(siRNA)沉默肾上腺髓质素(ADM)基因对黑素瘤细胞系A375增殖和凋亡的影响。方法 实时荧光定量-PCR(qRT-PCR)检测干扰效果,并选出干扰效果最好的siRNA。用筛选出的最有效siRNA转染A375细胞为实验组;转染非特异序列的细胞为阴性对照组,未转染的细胞为空白对照组。免疫细胞化学法蛋白水平检测干扰效果;噻唑蓝法(MTT)分别测定沉默ADM基因 24、48 h后A375细胞增殖的变化;流式细胞仪(FCM)检测干扰ADM基因48 h后A375细胞的凋亡情况。结果 qRT-PCR显示ADM-siRNA-2干扰效果最好。免疫细胞化学结果显示转染ADM-siRNA-2后ADM蛋白的表达显著低于未转染组和阴性对照组。MTT结果显示,转染ADM-siRNA-2的细胞24、48 h吸光度A值为0.389 ± 0.0375,0.469 ± 0.0330,低于空白对照组 ( 0.574 ± 0.0733、0.685 ± 0.0154)和阴性对照组(0.548 ± 0.0376、0.676 ± 0.0374),差异均有统计学意义(P值均 < 0.05),空白对照组和阴性对照组比较,差异无统计学意义(P值均 > 0.05)。FCM检测显示转染ADM-siRNA-2组的细胞早期凋亡率为(20.200 ± 6.046)%,高于空白对照组(1.667 ± 0.340)%和阴性对照组(4.587 ± 1.294)%,差异有统计学意义(P值均 < 0.05),空白对照组和阴性对照组比较,差异无统计学意义(P值均 > 0.05)。结论 siRNA沉默ADM基因对A375增殖有抑制作用;而对凋亡则有明显促进作用。