中华皮肤科杂志 ›› 2010, Vol. 43 ›› Issue (8): 579-582.

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P物质对HaCaT细胞一氧化氮合成的影响

叶巧园1,杨艳平2,樊翌明3   

  1. 1. 广东省东莞市东华医院皮肤科
    2. 广东医学院附属医院
    3. 湛江广东医学院附属医院皮肤科
  • 收稿日期:2009-12-18 修回日期:2010-03-26 出版日期:2010-08-15 发布日期:2010-08-10
  • 通讯作者: 叶巧园 E-mail:jhbws@21cn.com
  • 基金资助:

    广东省自然科学基金

Effects of substance P on nitric oxide synthesis in HaCaT cells

  • Received:2009-12-18 Revised:2010-03-26 Online:2010-08-15 Published:2010-08-10

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摘要：

目的 观察P物质、NK1受体拮抗剂和一氧化氮合酶（NOS）抑制剂对体外培养的人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞一氧化氮（NO）分泌和诱生型NOS（iNOS）表达的影响。方法 用不同浓度P物质（10-9 ～ 10-6 mol/L）或联合应用10-8 mol/L P物质和3 × 10-7 mol/L spantide、10-7 mol/L氨基胍、10-6 mol/L 7-硝基吲唑、10-5 mol/L L-NAME处理HaCaT细胞24 h，硝酸还原酶法测定培养上清液中NO含量。HaCaT细胞中加入10-8 mol/L P物质，1 h、24 h、48 h后用RT-PCR检测iNOS mRNA表达。结果 10-9 ～ 10-6 mol/L P物质可诱导HaCaT细胞分泌NO，其中以10-8 mol/L P物质效应最明显。Spantide在各个时间点上（30 min及1、3、6、12、24 h）均可明显抑制P物质诱导的HaCaT细胞NO合成（P < 0.01），L-NAME组在3个时间点上（30 min、1 h、24 h）、7-硝基吲唑组在30 min、1 h后HaCaT细胞NO水平明显低于P物质组（P < 0.05），但氨基胍组与P物质组在各个时间点上差异均无统计学意义（P > 0.05）。10-8 mol/L P物质处理HaCaT细胞后24 h、48 h，iNOS mRNA表达量分别为0.199 ± 0.018、0.516 ± 0.030，两个时间点之间差异有统计学意义（P < 0.01）。结论 P物质可通过激活细胞上NK1受体促进HaCaT细胞分泌NO，但iNOS可能不是P物质诱导HaCaT细胞分泌NO的主要来源。

关键词: P物质, HaCaT细胞, 一氧化氮, 一氧化氮合酶

Abstract:

Objective To observe the effects of substance P （SP）, NK1 receptor antagonist and nitric oxide synthase （NOS） inhibitors on the secretion of nitric oxide （NO） and expression of inducible NOS （iNOS） by immortalized human keratinocyte line HaCaT. Methods The NO level in supernatant of cultured HaCaT cells was measured by nitrate reductase assay after treatment with different concentrations （10-9 to 10-6 mol/L） of SP, or the combination of SP （10-8 mol/L） and spantide （3 × 10-7 mol/L）, aminoguanidine （10-7 mol/L）, 7-nitroindazole （10-6 mol/L） or L-NAME （10-5 mol/L） for various durations. Reverse transcription-PCR was performed to measure the expression of iNOS mRNA in HaCaT cells incubated with SP of 10-8 mol/L for 1, 24 and 48 hours. Results The SP of 10-9 to 10-6 mol/L significantly induced the production of NO by HaCaT cells, and the highest level of NO was observed in HaCaT cells treated with SP of 10-8 mol/L. The synthesis of NO by HaCaT cells induced by SP was inhibited by Spantide of 3 × 10-7 mol/L at all time points （30 minutes, 1, 3, 6, 12, 24 hours, all P < 0.01）, by L-NAME of 10-5 mol/L at 3 time points （30 minutes, 1, 24 hours） and by 7-nitroindazole of 10-6 mol/L at 2 time points （30 minutes, 1 hour, both P < 0.05）, but not by aminoguanidine of 10-7 mol/L at any time point （all P > 0.05）. After treatment with SP of 10-8 mol/L, the relative mRNA expression of iNOS was 0.199 ± 0.018 and 0.516 ± 0.030 at 24 and 48 hours, respectively, and there was a statistical difference between the two time points （P < 0.01）. Conclusions SP can reinforce the secretion of NO by HaCaT cells via NK1 receptor activation, but iNOS is unlikely to be the primary origin of NO secreted by HaCaT cells induced by SP.

Key words: substances P, HaCaT cell, nitric oxide, nitric oxide synthase