摘要:
目的:构建沙眼衣原体E型主要外膜蛋白(MOMP)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌(BL-21)中融合表达,为沙眼衣原体疫苗的研究提供材料。方法:用PCR技术扩增E型沙眼衣原体MOMP基因片段,再将其定位插入到原核表达载体pGEX中,构建重组表达质粒。然后将重组表达质粒转化入大肠杆菌(BL-21)中,并用酶切分析、PCR扩增及部分序列测定等方法对重组质粒进行了鉴定。然后诱导表达,用SDS-PAGE及蛋白印迹进行鉴定,然后进行蛋白纯化。结果:PCR扩增出约1202bp DNA片段,序列测定证实与GenBank登陆的E型沙眼衣原体一致;表达产物的相对分子量为66KD,与预期分子量相符,蛋白印迹证实表达产物为特异性蛋白,并纯化获得大量蛋白。结论:成功的构建了原核表达载体pGEX/MOMP,在大肠杆菌中得到了表达,并得到了纯化后的蛋白。