中华皮肤科杂志 ›› 2013, Vol. 46 ›› Issue (12): 885-888.
蒋艳玲1,赵明2,梁功平3,王利涛4,苏玉文2
摘要: 【摘要】 目的 探讨1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对人表皮角质形成细胞株HaCaT细胞增殖活性、基因组DNA总体甲基化水平及增殖相关基因启动子甲基化水平的影响。 方法 10-6、10-7、10-8 mol/L 1,25(OH)2D3作用HaCaT细胞24 h后,噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度1,25(OH)2D3对HaCaT细胞增殖活性的影响;总体DNA甲基化试剂盒检测基因组DNA总体甲基化水平。10-6 mol/L 1,25(OH)2D3作用HaCaT细胞24 h后,实时定量聚合酶链反应(PCR)法检测DNA甲基转移酶(DNMT)和甲基结合蛋白(MBD)mRNA表达水平,甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测凋亡相关基因程序化细胞死亡因子5(PDCD5)和基质金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP2)启动子区DNA甲基化状态。 结果 与溶媒对照组比较,10-6 mol/L 1,25(OH)2D3处理组HaCaT细胞增殖活性及基因组DNA总体甲基化显著降低(细胞活力:0.152 ± 0.027比0.290 ± 0.017,P < 0.01;总体甲基化:0.187 ± 0.071比0.316 ± 0.049,P < 0.05),DNA甲基转移酶DNMT3a和DNMT3b mRNA水平显著降低(P值 < 0.01或0.05),甲基结合蛋白MECP2和MBD2、凋亡相关基因PDCD5、TIMP2 mRNA水平显著升高(P值 < 0.01或0.05)。此外,MS-PCR结果显示,1,25(OH)2D3处理组PDCD5、TIMP2基因启动子区DNA甲基化水平(0.380 ± 0.135,0.460 ± 0.172)较溶媒对照组(0.720 ± 0.121,0.680 ± 0.133)显著降低(均P < 0.05)。 结论 1,25(OH)2D3可降低HaCaT细胞基因组DNA总体甲基化水平,调控DNA甲基化修饰基因表达。此外,1,25(OH)2D3可降低凋亡相关基因PDCD5、TIMP2特异性启动子区甲基化水平,诱导PDCD5、TIMP2基因表达增加,抑制HaCaT细胞增殖。 【关键词】 骨化三醇; 角蛋白细胞; DNA甲基化