中华皮肤科杂志 ›› 2017, Vol. 50 ›› Issue (8): 579-583.
苏惠春1,2,罗阳3,刘笑纯4,张警兮4,韩悦4,姚煦5,王宝玺6
摘要: 目的 检测树突细胞特异性捕获非整合素的细胞间黏附分子(DC?SIGN)转染的HEK293T细胞和单核细胞来源的树突细胞(MDDC)膜表面DC?SIGN受体对转谷氨酰胺酶3(TG3)的识别和摄取能力。方法 采用脂质体转染的方法将融合有DC?SIGN基因片段及真核表达载体pGCMV?EGFP(增强绿色荧光蛋白)的质粒转染至HEK293T细胞,制备DC?SIGN?EGFP?HEK293T细胞;通过磁珠阴性分选出外周血中CD14+单核细胞,并通过粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4诱导获得MDDC。利用激光共聚焦显微镜及流式细胞仪检测转染的HEK293T细胞及MDDC上DC?SIGN受体对TG3蛋白的识别和摄取,并设立空白对照组(不加入Alexa Fluor?647染料标记的TG3)和阴性对照组(仅加入Alexa Fluor?647染料)。结果 TG3与HEK293T和MDDC细胞孵育3 h后,激光共聚焦显微镜及流式细胞仪均显示,TG3可以被HEK293T及MDDC细胞上DC?SIGN受体识别并结合摄取入细胞内,流式细胞仪检测显示TG3与MDDC的结合可被DC?SIGN 阻断抗体部分阻断。阴性对照组和空白对照组未见HEK393T或MDDC细胞对TG3的识别和结合。结论 TG3可以作为一种自身抗原被DC?SIGN受体识别、结合,并被介导摄取进入树突细胞。