摘要:
目的 比较几种转化沙眼衣原体鼠肺炎株(MoPn )对宿主细胞的感染力,鉴定与衣原体质粒侵袭细胞相关的毒力基因。 方法 培养携带敲除了不同开放阅读框架(ORF)质粒的转化菌株,并不断扩增收集。测定浓度后,以相同菌量接种并按离心 + 二乙胺乙基葡聚糖(DEAE)、离心、DEAE、无任何处理4个条件分别对菌株进行处理,采用间接免疫荧光法计数包涵体数目;分别于(20、40、60 h)观察各菌株连续3代感染细胞后菌斑形成速度与面积。用Lugol碘染色观察各菌株包涵体内糖原合成情况。 结果 敲除质粒编码蛋白Pgp4的菌株pGFP::CMΔPgp4在4种条件下包涵体数目分别为(10.20 ± 1.30)、(6.80 ± 0.44)、(3.00 ± 1.22)、(0.80 ± 0.45)个,阴性对照组质粒缺失株CMUT3包涵体数目分别为(6.40 ± 0.89)、(3.80 ± 0.83)、(1.60 ± 0.89)、(0.60 ± 0.54)个,同一条件下两者均表现出相近的感染力,包涵体数目均低于同一条件下其他菌株(均P < 0.01)。同一菌株不同条件下,包涵体数目差异有统计学意义(F = 845.310,P < 0.01),各菌株在离心 + DEAE条件下包涵体数目最多;连续3代感染细胞时菌斑形成速度和大小均低于其他菌株;并有糖原累积的障碍。 结论 Pgp4是衣原体质粒侵袭细胞相关的毒力基因之一。