中华皮肤科杂志 ›› 2014, Vol. 47 ›› Issue (5): 333-336.
孔杰1,孙毅娜2,赵乐然1,肖萌1,王敬1,李卓然1,刘原君3,刘全忠4
摘要: 【摘要】 目的 获得D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3基因及其蛋白,并鉴定其免疫原性。 方法 PCR扩增目的基因,将其定向插入原核表达载体pGEX-6P-1中,连接产物转化入大肠埃希菌DH5α,提取质粒进行酶切、测序、PCR鉴定。再将重组质粒转化入大肠埃希菌BL21并诱导表达,Western印迹鉴定目的蛋白,谷胱甘肽巯基转移酶(GST)磁珠纯化pgp3-GST融合蛋白。用纯化后的蛋白免疫新西兰家兔,Western印迹检测抗体与pgp3蛋白的结合,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗体效价。 结果 克隆目的基因序列长度为795 bp,与基因库中一致,Western印迹显示目的蛋白相对分子质量为54 000,并得到纯化蛋白。所得兔血清可识别pgp3蛋白,ELISA检测多克隆抗体效价达1 ∶ 25 600。 结论 成功表达具有强免疫原性的pgp3-GST融合蛋白,为进一步研究奠定基础。
孔杰 孙毅娜 赵乐然 肖萌 王敬 李卓然 刘原君 刘全忠. D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3的克隆、表达、鉴定及其免疫原性初探[J]. 中华皮肤科杂志, 2014,47(5):333-336. doi: