中华皮肤科杂志 ›› 2014, Vol. 47 ›› Issue (11): 767-771.
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吴琼1,陈浩2,周武庆1,1,李阿梅3,吕雅琳1,胡彬1,姜祎群2,孙建方2
摘要: 目的 探讨小鼠黑素瘤细胞B16F10与小鼠单核巨噬细胞RAW264.7共培养中Notch-RBP-J信号通路对巨噬细胞表型分化的影响。 方法 设计针对CBF1/RBP-Jκ基因的siRNA编码序列,转染至小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞。实验分4组:沉默前共培养组,B16F10细胞与RAW264.7细胞共培养;沉默后共培养组,B16F10细胞与RBP-Jκ基因沉默后的RAW264.7细胞共培养;空白对照组,单独培养的RAW264.7细胞;阳性对照组,白细胞介素4刺激诱导的RAW264.7细胞。Western印迹法、ELISA法及流式细胞仪检测各组巨噬细胞的表型;RT-PCR法检测各组notch1、notch2、DLL1、DLL4及Hes1的表达。采用SPSS17.0软件进行重复测量方差分析及单因素方差分析、线性趋势检验、Bonferroni两两比较。 结果 Western印迹结果显示,RAW264.7与B16F10共培养不同时间后,RAW264.7细胞的CD163在空白对照组、共培养24 h、48 h、72 h组、阳性对照组的相对表达量分别为1.016 ± 0.018、1.274 ± 0.034、2.065 ± 0.094、3.615 ± 0.144、3.099 ± 0.071,经单因素方差分析(n = 4),F = 527.42,P < 0.01,共培养后RAW264.7细胞CD163表达量较空白对照组增加;ELISA检测结果显示,共培养24、48、72 h,RAW264.7细胞培养上清液白细胞介素10的水平分别为(167.610 ± 3.527)、(433.433 ± 5.558)、(679.673 ± 8.101) ng/L。沉默后共培养24、48、72 h,RAW264.7细胞培养上清液白细胞介素10表达量分别为(63.403 ± 0.856)、(103.427 ± 2.072)、(202.297 ± 3.610) ng/L,较未沉默时降低(F = 8.01,P < 0.05)。Western印迹法及流式细胞仪分别检测沉默后共培养RAW264.7细胞CD163、CD206的表达量,均较未沉默时减少(P < 0.05)。RT-PCR示,沉默后共培养组较沉默前共培养组及对照组的Notch信号通路相关基因mRNA表达均降低。 结论 沉默Notch-RBP-J信号通路后共培养组中RAW264.7细胞向M2型极化较未沉默共培养组减少,总体表型仍为M2型;该通路的活化促进RAW264.7细胞向M2型极化。