中华皮肤科杂志 ›› 2012, Vol. 45 ›› Issue (8): 569-573.
曹一鑫1,冯新2,王建力1,陈莉3
1, 1, li chen lichen
摘要:
目的 在沉默血管内皮生长因子(VEGF)的荷人裸鼠皮肤鳞状细胞癌(鳞癌)移植瘤中观察肿瘤生长,探讨靶向VEGF小发夹核酸(shRNA)的作用。方法 生物合成靶向人VEGF基因的shRNA干扰真核表达质粒(psilencer-VEGF1-shRNA、VEGF-s1;psilencer-VEGF2-shRNA、VEGF-s2),同时合成含随机靶序列的阴性对照表达质粒(psilencer-Target-off-shrank,T-off)。将构建的质粒分别转染于筛选的人皮肤鳞癌细胞株(A431),获得稳转细胞株。实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应、双抗体夹心酶联免疫吸附法分别检测稳转细胞株中VEGF mRNA和VEGF蛋白的表达。用稳转细胞株制备荷人皮肤鳞癌裸鼠移植瘤模型,观察裸鼠体内肿瘤生长,6周后(20 d)处死裸鼠进行肿瘤病理学研究,免疫组化染色检测瘤组织VEGF、增殖细胞核抗原(PCNA)和CD34蛋白的表达。应用stata 7.0统计学软件进行统计学处理。组间比较采用t检验。结果 转染VEGF-s1和VEGF-s2的A431细胞中VEGF mRNA表达分别为27.85 ± 3.95和24.69 ± 2.83,表达量显著低于未转染组(54.06 ± 6.38,t值分别为6.05和7.29,P值均 < 0.01);VEGF蛋白表达分别为32.67 ± 2.52和29.27 ± 1.10,亦显著低于未转染组(52.85 ± 2.23,t值分别为8.04和11.53,P值均 < 0.01)。用转染VEGF-s1和VEGF-s2的A431细胞制备荷人皮肤鳞癌裸鼠移植瘤模型,裸鼠肿瘤体积分别为(192.50 ± 10.90) mm3和(203.67 ± 3.21) mm3,明显小于未转染组(272.00 ± 21.07 mm3,t值分别为5.80和5.55,P值均 < 0.01);裸鼠肿瘤重量分别为(0.05 ± 0.03) g和(0.13 ± 0.04) g,与未转染组(0.25 ± 0.02 g)比较明显减轻(t值分别为9.60和4.64,P值均 < 0.01);裸鼠肿瘤细胞中VEGF蛋白表达率分别为52.00% ± 2.00%和56.67% ± 3.06%,PCNA阳性率分别为37.01% ± 2.41%和33.94% ± 3.25%,CD34阳性血管数分别为2.05 ± 0.07和1.72 ± 0.10,与未转染组(70.00% ± 2.00%、72.11% ± 3.02%和4.01 ± 1.27)比较,均显著降低(P值均 < 0.01)。各项指标中,转染VEGF-s1和VEGF-s2组间、未转染组和T-off组间差异均无统计学意义(P > 0.05)。结论 靶向VEGF基因的shRNA能有效抑制A431细胞和荷人裸鼠皮肤鳞癌移植瘤中VEGF的表达,导致肿瘤生长受抑,肿瘤恶性表型减弱。