摘要:
目的 研究单纯疱疹病毒2型 (HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框3(ORF3)对顺铂诱导的非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)凋亡的影响。方法 构建重组质粒pEGPF-ORF3,并转染Vero细胞,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)验证目的基因的表达。顺铂诱导Vero细胞凋亡,通过荧光显微镜观察凋亡小体,Giemsa染色检测细胞核形态,噻唑蓝法(MTT法)检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞凋亡情况。实验结果采用SPSS13.0进行分析,各组间两两比较采用单因素方差分析和t检验。 结果 成功克隆HSV-2 333株ORF3基因,构建pEGFP-ORF3真核表达载体,RT-PCR验证该真核表达载体能在Vero细胞中高效表达。转染pEGFP-ORF3的Vero细胞经顺铂诱导凋亡后Giemsa染色,显示胞核蓝染,胞质淡浅,细胞形态正常。MTT 法分析显示,细胞增殖在转染pEGFP-ORF3组(2.56 ± 0.21)与未经任何处理的正常对照组(2.66 ± 0.13)比较,差异无统计学意义(P > 0.05),但高于顺铂诱导凋亡的正常对照组(1.65 ± 0.11)和pEGFP-C2组(1.56 ± 0.18),差异均有统计学意义(P < 0.05);流式细胞仪分析细胞凋亡率,转染pEGFP-ORF3组(4.03% ± 1.04%)与正常对照组(2.13% ± 0.09%)比较,差异无统计学意义(P > 0.05),但低于空质粒pEGFP-C2组(19.45% ± 2.05%),且差异有统计学意义(P < 0.05)。结论 HSV-2 LAT ORF3在Vero 细胞中具有抗顺铂诱导的凋亡作用。
中图分类号: