中华皮肤科杂志 ›› 2017, Vol. 50 ›› Issue (12): 894-898.doi: 10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2017.12.008
罗丽敏 李军 刘劲松 朱红 王郧莲 刘菡
Luo Limin, Li Jun, Liu Jinsong, Zhu Hong, Wang Yunlian, Liu Han
摘要: 目的 探讨尿紧张素Ⅱ(UⅡ)对体外培养人正常皮肤成纤维细胞(NF)增殖和α平滑肌肌动蛋白(α?SMA)表达的生物学功能影响及调控机制。方法 原代培养NF,采用反转录PCR和Western印迹法分别检测UⅡ及其受体mRNA和蛋白表达水平。采用CCK8法观察不同浓度(10?10、10?9、10?8、10?7、10?6 mol/L)UⅡ作用0、6、12、24、48 h对NF增殖的影响,筛选出UⅡ最佳作用浓度为10?8 mol/L,刺激时间为24 h。将NF分为5组:对照组(不含UII)、UⅡ组、UⅡ + 尼卡地平(钙通道阻断剂,10?5 mol/L)组、UⅡ + PD98059[丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)抑制剂,10?5 mol/L]组和UⅡ + 环孢素[钙蛋白激酶(CaM PK)阻断剂,10?5 mol/L]组,UⅡ浓度均为10?8 mol/L,刺激NF 24 h后,采用CCK8法检测各组NF的增殖活性,以实时定量荧光PCR和Western印迹法分别检测各组α?SMA mRNA与蛋白的相对表达水平。结果 NF表达UⅡ受体,不表达UⅡ。对照组、UⅡ组、UⅡ+ 尼卡地平组、UⅡ+ PD98059组和UⅡ+ 环孢素组NF细胞增殖活性(A450值)分别为1.036 ± 0.046、1.405 ± 0.158、1.121 ± 0.109 、1.192 ± 0.089和1.141 ± 0.056,组间差异有统计学意义(F = 9.587,P < 0.01),UⅡ组高于对照组、UⅡ+ 尼卡地平组、UⅡ+ PD98059组、UⅡ+ 环孢素组(q值分别为8.263、6.355、4.774、5.912,均P < 0.05)。5组间NF细胞α?SMA mRNA与蛋白的相对表达量差异亦均有统计学意义(F值分别为6.351、7.045,均P < 0.01),且UⅡ组α?SMA mRNA及蛋白表达量均高于另4组(均P < 0.05)。结论 UⅡ可能通过钙通道、MAPK和CaM PK通路诱导NF增殖和α?SMA的表达。