中华皮肤科杂志 ›› 2005, Vol. 38 ›› Issue (2): 108-111.
周文明1, 赵建龙2, 杨森1, 曹慧敏2, 李伟1, 沈玉君1, 张书梅1, 杜文辉1, 张学军1
ZHOU Wen-ming 1, ZHAO Jian-long2, YANG Sen1, CAO Hui-min2, LI Wei1, SHEN Yu-jun1, ZHANG Shu-mei1, DU Wen-hui1, ZHANG Xue-jun1
摘要: 目的 研制一种DNA芯片,结合多重PCR方法快速检测泌尿生殖道炎症3种病原体及其耐药类型。方法 根据泌尿生殖道病原体淋球菌、沙眼衣原体和解脲脲原体的基因保守序列设计引物和探针,分别检测3种病原体;根据淋球菌gyrA、parC和16srRNA基因序列突变位点设计引物和探针,分别检测淋球菌对喹诺酮类药物和大观霉素的耐药性;根据淋球菌和解脲脲原体的共同tetM基因序列设计引物和探针,检测对四环素的耐药性。制备芯片,对152份泌尿生殖道拭子提取DNA进行7重PCR扩增,并且Cy5荧光标记包含上述基因序列的目的DNA片段,与固定在芯片上的探针杂交,芯片信号分析系统Scanarray 4000在635nm处扫描并分析结果,并与临床检查结果比较。结果 DNA芯片敏感性是0.01fg质粒DNA。152份泌尿生殖道炎症拭子其病原体种类及其耐药类型全部可用DNA芯片检测出来,与目前临床检查结果有较好的一致性(K>0.8)。结论 研制的DNA芯片结合7重PCR方法快速检测泌尿生殖道淋球菌、沙眼衣原体和解脲脲原体3种病原体及其对喹诺酮类药物、大观霉素和四环素的耐药类型,具有快速、高特异性和高灵敏度,可以应用于临床检测。