摘要:
目的 探讨大疱性类天疱疮(BP)和妊娠疱疹(HG)患者血清抗BPl80 NC16A 抗体的纯化和鉴定方法。方法 原核表达系统pGEX-2TBP180NC16A表达GST/NC16A融合蛋白,将融合蛋白与谷胱甘肽琼脂糖凝聚微珠进行共价偶联。微珠亲和层析法纯化BP和HG患者血清中抗BP180 NC16A抗体,并用ELISA、免疫荧光、及Western印迹进行鉴定。结果 原核表达系统pGEX-2TBP180NC16A表达37 000 GST/NC16A融合蛋白,微珠亲和层析法纯化后得单一抗BP180 NC16A抗体。经ELISA方法定量后确定其含量为2.4 mg/ml;该抗体能与人皮肤基底膜带结合,证明抗体活性;免疫印迹可见单一片段,显示抗体纯度。结论 微珠亲和层析法纯化的BP和HG患者血清中抗BP180 NC16A自身抗体活性高、特异性强。