摘要: 目的 探讨长波紫外线(UVA)诱导人皮肤成纤维细胞(HSF)光老化中miR-146a的表达情况,以及上调miR-146a表达对其靶基因Smad4及细胞光老化的影响。 方法 以10 J/cm2 UVA照射HSF(UVA照射组),分别在0、3、7、14 d提取RNA,实时定量PCR检测miR-146a的表达量。通过慢病毒转染上调miR-146a的表达(miR-146a过表达组),在7 d、14 d后用荧光显微镜观察转染效率,并通过实时定量PCR验证细胞内miR-146a表达量。空白对照组为正常培养的HSF(不做任何处理),miR-146a过表达组为慢病毒转染HSF后,再用UVA照射。MTT法检测空白对照组、UVA照射组、miR-146a过表达组、miR-146a过表达组细胞增殖吸光度(A值),实时定量PCR检测各组细胞内老化相关基因p53、p16和p21 mRNA的表达,Western印迹法检测各组细胞内Smad4蛋白表达。采用重复测量的方差分析、析因设计的方差分析进行统计学分析。 结果 重复测量的方差分析显示,随培养时间的延长,UVA照射组和空白对照组miR-146a的表达量均逐渐下降(F = 213.840,P < 0.01);UVA照射组表达量低于空白对照组(F = 52.55,P < 0.01),且照射时间越长,下调越明显。慢病毒转染HSF后,细胞内均有较高的荧光表达,miR-146a过表达组在第7天(10.31 ± 0.17)与第14天时(9.65 ± 0.19)的miR-146a表达量差异无统计学意义(P > 0.05),但较空白对照组(分别为8.33 ± 0.13和7.86 ± 0.11)显著增高,组间差异有统计学意义(F = 42.49,P < 0.01)。析因设计的方差分析显示,UVA照射对细胞增殖活性有抑制作用(P < 0.01),UVA照射组、UVA + miR-146a组细胞增殖均分别低于空白对照组、miR-146a过表达组(P < 0.01);慢病毒转染上调miR-146a的表达对细胞增殖活性也有影响(P < 0.01),但miR-146a过表达组与空白对照组差异无统计学意义(P > 0.05),UVA + miR-146a组显著高于UVA照射组(P < 0.01)。实时定量PCR和Western印迹法结果显示,UVA照射可上调p21、p53、p16 mRNA的表达(均P < 0.01),同时对细胞内Smad4蛋白表达有促进作用(P < 0.01);UVA照射组、UVA + miR-146a组p21、p53、p16 mRNA和Smad4蛋白表达均分别高于空白对照组、miR-146a过表达组(均P < 0.01),而miR-146a过表达组与空白对照组相比差异均无统计学意义(均P > 0.05),UVA + miR-146a组均显著低于UVA照射组(均P < 0.01)。 结论 在UVA诱导光老化的HSF中,miR-146a的表达受到抑制,上调其表达能够抑制Smad4的表达,促进光老化细胞增殖,起到抗细胞光老化的作用。