中华皮肤科杂志 ›› 2015, Vol. 48 ›› Issue (8): 568-571.

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α硫辛酸对人皮肤成纤维细胞自噬的影响

郑云鹏1,陈旭2,黄丹3,徐松2,顾恒2   

  1. 1. 中国医学科学院皮肤病研究所
    2. 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所
    3. 中国医学科学院皮肤病研究所理疗科
  • 收稿日期:2014-11-19 修回日期:2015-06-09 出版日期:2015-08-15 发布日期:2015-07-30
  • 通讯作者: 顾恒 E-mail:guheng@aliyun.com
  • 基金资助:

    国家自然科学基金面上项目;江苏省基础研究计划（自然科学基金）面上项目;高等学校博士学科点专项科研基金;2014年度北京协和医学院协和青年科研基金资助;北京协和医学院研究生创新基金

Effects of alpha-lipoic acid on autophagy in human skin fibroblasts

1, HUANG Dan3, 1,   

  • Received:2014-11-19 Revised:2015-06-09 Online:2015-08-15 Published:2015-07-30

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摘要：

目的 评价α硫辛酸对人皮肤成纤维细胞自噬水平的影响。 方法 人皮肤成纤维细胞与终浓度分别为0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.50 mmol/L的α硫辛酸孵育4、12和24 h后，采用噻唑蓝法检测细胞增殖活性，单丹酰戊二胺（MDC）染色法检测细胞自噬水平，Western印迹法检测微管相关蛋白1轻链3-B（LC3-B）表达。 结果 孵育4 h和12 h时，0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.50 mmol/L α硫辛酸组间人皮肤成纤维细胞增殖活性（A490值）差异均无统计学意义（F值分别为2.85、1.34，均P > 0.05）；孵育24 h时，各组间差异有统计学意义（F = 10.41，P < 0.01）。MDC法检测显示，孵育4 h和12 h时，0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.50 mmol/L α硫辛酸组间自噬体阳性细胞百分率差异均无统计学意义（F值分别为0.11、0.10，均P > 0.05）；孵育24 h时，各组间差异有统计学意义（F = 8.03，P < 0.05）。Western 印迹法检测显示，孵育4 h和12 h时，0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.50 mmol/L α硫辛酸组间细胞LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化（LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ）水平差异均无统计学意义（F值分别为3.38、2.13，均P > 0.05），但孵育24 h时各组间差异有统计学意义（F = 37.49，P < 0.01）。 结论 α硫辛酸可能抑制人皮肤成纤维细胞基础自噬。

Abstract:

Zheng Yunpeng, Chen Xu*, Huang Dan, Xu Song, Gu Heng. *Institute of Dermatology, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College; Jiangsu Key Laboratory of Molecular Biology for Skin Diseases and STIs, Nanjing 210042, China Corresponding authors: Gu Heng, Email: guheng@aliyun.com; Chen Xu, Email: doctor_chx@126.com 【Abstract】 Objective To evaluate the effects of alpha-lipoic acid （α-LA） on autophagy in human skin fibroblasts （HSFs）. Methods HSFs at passage 3 － 5 were divided into several groups to be cultured with α-LA at final concentrations of 0, 0.01, 0.05, 0.10, 0.15, 0.20 and 0.50 mmol/L for 4, 12 and 24 hours, respectively. Methyl thiazolyl tetrazolium （MTT） assay was performed to evaluate cellular proliferative activity, monodansylcadaverin （MDC） staining to determine autophagy levels, and Western blot to measure the expression of the microtubule-associated protein 1 light chain-3B （LC3-B）. Results After incubation for 24 hours, there was a significant difference in the proliferative activity of HSFs among all the groups （F = 10.41, P < 0.05）, while no significant differences were observed after incubation for either 4 or 12 hours （F = 2.85, 1.34, respectively, both P > 0.05）. MDC staining also showed a significant difference in the percentage of autophagosome-positive cells among all the groups after 24-hour incubation （F = 8.03, P < 0.05）, but no significant difference after either 4- or 12-hour incubation （F = 0.11, 0.10, respectively, both P > 0.05）. Western blot revealed that the degree of conversion from LC3-Ⅰ to LC3-Ⅱ（LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰratio） was significantly different among all the groups after 24-hour incubation （F = 37.49, P < 0.05）, but similar after 4- and 12-hour incubation （F = 3.38, 2.13, respectively, both P > 0.05）. Conclusion α-LA may inhibit basal autophagy in HSFs.