中华皮肤科杂志 ›› 2015, Vol. 48 ›› Issue (4): 256-260.
张丽超1,张海荣2,周炳荣3,骆丹4,马立文1,张家安1,王申1,易飞1,Maya Valeska Gozali1,刘娟1
摘要:
目的 研究氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)对中波紫外线(UVB)应激性衰老成纤维细胞(UVB-SIPS-FB)的氧化损伤和凋亡作用。 方法 正常成纤维细胞及UVB-SIPS-FB均分为2 h和6 h孵育组,每组内再分为7组:对照组、ALA组、100 J/cm2照光组、3组不同红光照射剂量ALA-PDT处理组(25 J/cm2组、50 J/cm2组、100 J/cm2组)及抗氧化剂NAC + 50 J/cm2红光照射ALA-PDT处理组。采用635 nm红光(能量密度50 mW/cm2)照射处理后,使用荧光显微镜、流式细胞仪检测各组细胞中活性氧及线粒体膜电位水平;Hoechst染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率。数据用SPSS 13.0软件分析,多组间均数行单因素方差分析,结合q检验。结果 孵育2 h, 25、50、100 J/cm2 ALA-PDT组UVB-SIPS-FB凋亡率(分别为7.34% ± 0.87%、8.39% ± 1.16%、17.03% ± 1.29%)较对照组(3.81% ± 0.59%)上升(F = 102.70,均P < 0.05),NAC + 50 J/cm2 ALA-PDT组凋亡率(5.35% ± 0.58%)下降(P < 0.05);孵育6 h,25、50、100 J/cm2 ALA-PDT组UVB-SIPS-FB凋亡率(分别为13.85% ± 1.71%、23.40% ± 2.14%、41.02% ± 2.73%)较对照组(5.09% ± 1.64%)显著上升(F = 106.00,均P < 0.05),NAC + 50 J/cm2 ALA-PDT组凋亡率(9.97% ± 3.23%)显著下降(P < 0.05)。单纯ALA组或照光组UVB-SIPS-FB凋亡率与对照组差异均无统计学意义。ALA-PDT处理组细胞活性氧荧光强度显著上升,线粒体去极化增强,这些现象与ALA孵育时间及红光照射剂量均呈量效依赖性关系。使用抗氧化剂NAC预处理可以减少ALA-PDT诱导的活性氧增多及线粒体去极化增强,与凋亡率变化一致。 结论 ALA-PDT可诱导UVB-SIPS-FB出现明显的细胞凋亡,其作用机制可能与ALA-PDT对细胞的氧化损伤有关。